Обшитые: Подплечики обшитые втачные цв черный размер 10 (уп 100 пар) в-10чер купить в Москве

1. (переходный) Чтобы положить (что-нибудь, например, нож или меч) в ножны.

   Антоним: unsheathe

   • 1599 , Уильям Шекспир, «Трагедия Юлия Цезаря», в Комедии, истории и трагедии г-на Уильяма Шекспира: опубликованы в соответствии с подлинными копиями оригинала (Первое фолио), Лондон: […] Исаак Яггард и Эд [уорд] Блаунт, опубликовано 1623, OCLC 606515358 , [Акт IV, сцена iii], стр. 125, столбец 1:

     Ножны ваш кинжал: / Злитесь, когда вы будете, он будет иметь вид: […]

   • [1716] , [Джон] Гей, «Книга III. О прогулке по улицам ночью », в Trivia: Or, The Art of Walking the Streets of London , London: Printed for Bernard Lintott, […], OCLC 13598122 , page 53:

     At Sight of Тебя, Злодей убивает свой Меч, / Нор ſ весит Стену, чтобы похитить богатый Клад.

   • 1838 , Мартин Фаркуар Таппер, «В поисках гордости», в «Философия пословиц: книга мыслей и аргументов, первоначально рассматриваемая» , Лондон: Джозеф Рикерби, […], OCLC 36892655 , стр. 69:

     Знай улыбающегося врага, который открыто вкладывает в ножны свое оружие, / Но втайне смешивает яд со священной солью гостеприимства.

   • 1865 , Ричард Ф [рансис] Бертон, составитель, «Притчи на языке Га или Аккра», в «Остроумие и мудрость из Западной Африки»; или Книга пресловутой философии, идиом, загадок и лаконизмов, , Лондон: братья Тинсли, […], OCLC 156107375 , номер 190, стр. 169:

     Ке окакла фу ле, обон окэ-ву. Если твой нож порезал тебя, ты вложишь в ножны . N.B. — Это значит, что ты не выбрасываешь его.

2. (переходный) Обернуть (что-нибудь) защитным покрытием.

   Антоним: unsheathe

   • 1765 , Эдвард Янг, «Оправдание провидения: или истинная мера человеческой жизни. В котором страсти рассматриваются в новом свете », в Произведениях в прозе преподобного Эдварда Янга, доктора юридических наук. […] , Лондон: напечатано для П. Брауна, Х. Хилла и С. Пейна, OCLC 1065028041 , стр. 239:

     Веселое сердце делает добро, как лекарство , но зависть разъедает, как яд ; это ſo ſharp, что он режет тело, которое огревает его.

   • 1843 , Ибн Халликан, цитируя Наджм ад-дина Муса аль-Камрави, «Абу ль-Хасан аль-Хусри», в [Уильяме] Мак Гукин де Слейн, перевод, Биографический словарь Ибн Халликана: Перевод с Арабский (Фонд восточных переводов; № 59), том I, Париж: напечатано для Фонда восточных переводов Великобритании и Ирландии; продано Бенджамином Дюпра, […] и Алленом и Ко, […], OCLC 570257159 , стр. 243:

     Когда ты вкладываешь взглядов в твои веки, они наносят смертельные раны: какими они должны быть, когда ты вытащите их из ножен!

   • 1954 , Александр Алдерсон, глава 17, в Тонкий Минотавр , Лондон: Джон Гиффорд, OCLC 7313814 , OL 12152304W :

     Она обшила ног простейшими нейлонами, которые отец привез с континента и надел ей черные замшевые туфли на высоком каблуке без пальцев.

   • 1975 , Сол Беллоу, Подарок Гумбольдта [Avon ed., 1976, p. 232]:

     Но он так и не смог придумать достаточно материала для чар или сновидений, чтобы вложить в ножны себя. Это не покрыло бы.

3. (переходный) животного: втягивать или втягивать (часть тела) в тело, например когти в лапу.

   Антоним: unsheathe

   • 1687 , [Джон Драйден], «Третья часть», in The Hind and the Panther.Поэма в трех частях , 2-е издание, Лондон: Отпечатано для Джейкоба Тонсона […], OCLC 460679539 , page 88:

     Итак, когда у великого Lyon есть равное право / его сила, он руины для боя; / Но когда его враги растекаются по равнине, / Он вонзает лапы, распускает гневную гриву; / И, молясь о славных почестях дня, / Подходит и разоблачает бесславную Добычу, […]

   • 1750 , [Ноэль-Антуан Плюш], «Птицы.Диалог XI », в Samuel Humphreys, пер., Spectacle de la Nature: Or, Nature Display’d. Рассуждения о таких подробностях естествознания, которые считались наиболее подходящими для возбуждения любопытства и формирования умы молодежи. […] Переведено с французского оригинала , 7-е исправленное и исправленное издание, Лондон: напечатано для Р. Франклина, […], OCLC 960914618 , page 183:

     Нам говорят, что росы и соки цветов это их [колибри ‘] Пища, которую они извлекают своим маленьким Язычком, длина которого превышает длину их Билла, и служит им вместо Хобота, который они сокращают, и — вмещают в их Билле.

4. (переходный, датированный или литературный, поэтический, образно) Колоть (острый предмет, такой как меч, коготь или бивень) во что-то.
   • 1593 , [Уильям Шекспир], Венвс и Адонис , Лондон: отпечатано Ричардом Филдом, […], OCLC 837166078 , стих 186; Venvs & Adonis Шекспира: […] , 4-е издание, Лондон: J [oseph] M [alaby] Dent and Co. […], 1896, OCLC 19803734 , строки 1115–1116, page 65:

     И, уткнувшись носом в его бок, любящая свинья / вложила в ножны , не замечая бивня в его мягком паху.

   • г. 1591–1592 , Уильям Шекспир, «Третья часть Генриха Сикса, […]», в Комедии, истории и трагедии г-на Уильяма Шекспира: опубликованы в соответствии с подлинными копиями оригинала (Первый фолио) , Лондон: Отпечатано Исааком Яггардом и Эдом [Уордом] Блаунтом, опубликовано 1623, OCLC 606515358 , [Акт V, сцена v], стр. 171, столбец 1:

     Нет, не будь меня отсюда, ты меня заметь: / Здесь ſheath Меч твой, Иль простит тебе мою смерть: […]

   • 1708 , Эразм Ротеродамус, «[Проповедь согласия и реформирования, произнесенная на созыв в церкви Святого Павла в Лондоне, написанная Джоном Колетом, D.D. Декан указанной церкви в 1511 году.] Жизнь доктора Колета », в [Джон Дантон], редактор, Второй том« Феникса: Или, Возрождение редких и ценных произведений, не где быть ». Нашел но в шкафах любопытных. […] , том II, номер Phenix XVII, Лондон: напечатано для Дж [он] Морфью […], OCLC 42944820 , § 29, стр. 25:

     [T] эй, кто питал ненависть или амбиции , или Covetouſneſs, сражаются со злыми людьми, и «чтобы убивать друг друга, сражайтесь не под знаменем Chriſt, но с дьяволом; hewing […] как трудно для них быть в милосердии (без которого ни один человек не увидит Бога), который вонзит свои мечи в свои чрево.

5. (переходный, устаревший или редкий, образно говоря) Отказаться или прекратить (враждебность и т. Д.)
   • г. 1597 , Уильям Шекспир, […] [T] он Мерри Уьюз из Виндзора. […] (Первый квартал), Лондон: […] T [homas] C [reede] для Артура Ихонсона, […], опубликовано 1602, OCLC 670741489 , [Акт II, сцена iii]:

     Пусть он умри, но устрани ſheth своего нетерпения, облейте холодной водой свой воротник, […]

6. (переходный, устаревший) Обеспечить (меч и др.) Ножнами.
   • г. 1590–1592 , Уильям Шекспир, «Укрощение строптивой», в Комедии, рассказы и трагедии г-на Уильяма Шекспира: опубликованы в соответствии с подлинными копиями оригинала (Первый фолио), Лондон: Отпечатано Исааком Яггард и Эд [Уорд] Блаунт, опубликовано 1623, OCLC 606515358 , [Акт IV, сцена i], стр. 221, столбец 2:

     Натаниэльс coate ir не был полностью изготовлен / And Gabrels pumpes все были vnpinkt i’th heele: / Не было Linke для шляпы цвета Peters , / И кинжал Walters не был получен из ſheathing : […]

7. (переходный, лекарственный, устаревший) Для облегчения резкого или болезненного воздействия (наркотика, яда и т. Д.).
   • 1716 , Джон Рэдклифф, «[Приложение к рецепту доктора Рэдклиффа] Ramose, Flexile, Smooth Medicines. [Наблюдения.] », В фармакопее Рэдклиффана: Или« Рецепты доктора Рэдклиффа, добросовестно взятые из его оригинальных рецептов ». […] , 2-е исправленное издание, Лондон: Отпечатано для Чарльза Ривингтона, […], OCLC 5103 , страницы 540 и 541:

     [страница 540] Гладкие и маслянистые лекарства действуют по heathing ядовитые соли в крови и предотвращающие их неудобства; и расслабляет Волокна и, следовательно, расширяет их.[…] [страница 541] [Они] удобны при кашле, от тонкого и острого насморка, потому что они — отравляют Соли, раздражающие легкие.

   • 1738 Декабрь, К. Мортимер, «VI. Резюме К. Мортимера, доктора медицинских наук, секретаря Королевского общества, вступительной диссертации, опубликованной в Витемберге в 1736 г. доктором Абрахамом Фатером, F.R.S. О лекарстве от укуса гадюки, вылеченном саллад-маслом », в Philosophical Transactions. Дать некоторый отчет о нынешних начинаниях, исследованиях и трудах гениальных людей во многих значительных частях света , том XXXIX, номер 451, Лондон: напечатано для T.Вудворд, […]; и К. Дэвис […]; принтеров Королевскому обществу, OCLC 630046584 , стр. 443:

     Он завершает это разделение, пытаясь объяснить способ работы своего [оливкового масла], который он приписывает его жиру, не вызывающему покоя, посредством чего оно нагревает Спикула Пуион.

   • 1747 , Tho [mas] Short, Medicina Britannica: Или трактат о таких физических растениях, которые обычно можно найти на полях и садах в Великобритании: содержащий подробное описание их природы, достоинств и Использует.[…] , 2-е издание, Лондон: Отпечатано для Р. Манби и Х. Шута Кокса, […], OCLC 14304749 , параграф 73, стр. 66:

     Comfry Root ( Symphytum ) является основной уязвимой ; он очень клейкий и густой, его липкий сок «нагревает» «Шарпне» юмора; […]

Спряжение [править]

Альтернативные формы [править]

Производные термины [править]

Переводы [править]

положить (что-нибудь) в ножны

обложить (что-нибудь) защитным покрытием

животного: втягивать или втягивать (часть тела) в тело

воткнуть (острый предмет) во что-то

Приведенные ниже переводы необходимо проверить и вставить выше в соответствующие таблицы переводов, удалив все числа.«Shēth (e, n. (1))», в MED Online , Анн-Арбор, штат Мичиган: Университет Мичигана, 2007; «оболочка, n. ¹ », в OED Online ⁠ , Oxford, Oxfordshire: Oxford University Press, 1914; «sheath, n. », в Lexico , Dictionary.com; Oxford University Press, 2019 – настоящее время.

Молекулярная архитектура покрытого оболочкой полярного жгутика у Vibrio alginolyticus

Значение

Многие важные бактериальные патогены, такие как Vibrio cholerae и Helicobacter pylori , используют покрытый оболочкой жгутик в качестве основной органеллы для подвижности.Хотя бактериальные жгутики широко изучались в модельных системах, таких как Escherichia coli и Salmonella , о покрытых оболочкой жгутиках известно относительно мало. В этом исследовании мы используем криоэлектронную томографию с высокой пропускной способностью для визуализации тысяч полярных жгутиков у Vibrio alginolyticus . Мы не только раскрываем беспрецедентные детали жгутиков в оболочке у V. alginolyticus , но также раскрываем ключевые различия между жгутиками в оболочке и жгутиками без оболочки у одного и того же вида Vibrio .Наши исследования дают представление об уникальных аспектах покрытых оболочкой жгутиков, которые эффективно используются многими бактериальными патогенами для установления инфекции и распространения среди людей и других млекопитающих-хозяев.

Abstract

Vibrio — это грамотрицательные палочковидные бактерии, которые распространены повсеместно и часто очень подвижны в водной среде. Vibrio Плавательная подвижность обеспечивается полярным жгутиком, покрытым перепончатой ​​оболочкой, но этот покрытый оболочкой жгутик плохо изучен на молекулярном уровне из-за ограниченной структурной информации.Здесь мы используем Vibrio alginolyticus в качестве модельной системы для изучения покрытого оболочкой жгутика в интактных клетках путем сочетания криоэлектронной томографии (крио-ЭТ) и анализа субтомограмм с генетическим подходом. Мы выявили поразительные различия между жгутиками в оболочке и без оболочки в клетках V. alginolyticus , включая новую кольцевую структуру в нижней части крючка, которая связана с основным ремоделированием внешней мембраны и образованием оболочки. Используя мутанты, дефектные в моторных компонентах жгутика, мы определили специфическую особенность Vibrio- (также известную как Т-кольцо) как отличительную периплазматическую структуру с 13-кратной симметрией.Уникальная архитектура Т-образного кольца обеспечивает статическую платформу для набора комплексов PomA / B, которые необходимы для создания более высоких крутящих моментов для вращения покрытого оболочкой жгутика и быстрой подвижности клеток Vibrio . Более того, жгутиковый мотор Vibrio обнаруживает внутреннюю вариацию длины между связанными с внутренней и внешней мембраной комплексами, это указывает на то, что связанный с внешней мембраной комплекс может немного сдвигаться вдоль осевого стержня во время вращения жгутика. Вместе наш подробный анализ полярных жгутиков в интактных клетках дает представление об уникальных аспектах покрытого оболочкой жгутика и об особой подвижности видов Vibrio .

Подвижность часто важна для вирулентности бактериальных патогенов, а жгутик является главной органеллой подвижности многих бактерий. У большинства жгутиковых бактерий, таких как Escherichia coli и Salmonella enterica , жгутики функционируют как пропеллеры: вращение жгутиков против часовой стрелки приводит к объединению жгутиков вместе и плавному плаванию клетки (бегу), тогда как вращение по часовой стрелке жгутики вызывают случайное вращение клетки с небольшим поступательным движением (переворачивание) (1-3).Сложная хемотаксическая сигнальная система позволяет бактериям улавливать химические стимулы и эффективно плыть к благоприятной среде с помощью предвзятого случайного блуждания, комбинации «бега» и «кувырка» (1, 4).

Жгутик — это большой макромолекулярный узел, состоящий из длинной нити, крючка и мотора. Жгутиковый двигатель — это замечательная наномашина, встроенная в оболочку бактериальной клетки. Для сборки мотора требуется более 20 различных белков, которые можно разделить на несколько морфологических доменов.Кольцо MS встроено в цитоплазматическую мембрану. Кольцо C, известное как комплекс переключения, и устройство экспорта расположены на цитоплазматической стороне кольца MS. Стержень соединяет кольцо MS и крючок и обычно делится на дистальный стержень и проксимальный стержень. Кольца L и P на стержне действуют как втулки на внешней мембране и в слое пептидогликана соответственно. Статор — это генератор крутящего момента, встроенный в цитоплазматическую мембрану. В E. coli и Salmonella двухмембранный белковый комплекс, состоящий из MotA и MotB, функционирует как статор, будучи прикрепленным к слою пептидогликана.Приводимый в действие движущей силой протонов, статор генерирует крутящий момент, необходимый для вращения двигателя, крюка и нити накала. Статор имеет несколько общих черт, несмотря на различие в задействованных ионах и белках. Как правило, несколько блоков статора работают вместе (5), хотя одного статора достаточно для создания крутящего момента (6). Поэтапное фотообесцвечивание функционирующей моторной области показало, что статор очень динамичен и может быстро присоединяться к ротору или отделяться от него (5).Недавние отчеты показали, что ассоциация статор-ротор зависит от проводящих ионов (7, 8) и крутящего момента (9⇓ – 11).

Виды Vibrio очень подвижны и обладают жгутиками с полярными оболочками (12), которые сильно отличаются от жгутиков без оболочки, обнаруженных у E. coli и Salmonella . Мембранная оболочка выглядит как продолжение внешней мембраны, но ее функция остается плохо изученной. Более раннее исследование показало, что Vibrio с оболочкой жгутика потенциально может помешать иммунному ответу хозяина распознавать филамент (13).Более недавнее исследование показало, что вращение покрытых оболочкой жгутиков высвобождает липополисахарид, который может способствовать иммунному распознаванию во время инфекции Vibrio fischeri (14). Недавно для визуализации сборки покрытых оболочкой жгутиков in vivo было использовано быстрое исследование флуоресцентной визуализации с высоким разрешением (15). Исследования предоставляют доказательства в поддержку синхронного роста между оболочкой и филаментом. Однако механизм, лежащий в основе образования оболочки, остается неизвестным.

Vibrios используют ионы натрия в качестве источника энергии для вращения жгутиков, а белки PomA и PomB составляют статор, управляемый Na ⁺ (16).В отличие от статорного комплекса MotA / B, статорный комплекс PomA / B требует дополнительных компонентов Vibrio , MotX и MotY. Они образуют кольцеобразную структуру, называемую Т-образным кольцом, которое, по-видимому, характерно для управляемого натрием жгутикового двигателя (17⇓⇓ – 20). Другая особая кольцевая структура Vibrio (названная H-кольцом) расположена на вершине Т-образного кольца. FlgT является основным белковым компонентом H-кольца. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что оба кольца необходимы для сборки статора и функционирования статорного комплекса PomA / B (19, 21).

Чтобы лучше понять структуру и функцию жгутиков разных видов, криоэлектронная томография (крио-ЭТ) широко используется для визуализации интактных жгутиков в их клеточном контексте (22⇓ – 24). Несмотря на наличие общих тем, эти анализы продемонстрировали поразительное структурное разнообразие этих наномашин у разных бактерий (22). Например, двигатель Vibrio имеет 13 статоров, собранных вокруг ротора (25), тогда как двигатель Borrelia burgdorferi имеет 16 статоров и отличительную периплазматическую особенность (26).Чтобы глубже понять оболочку жгутика, а также структурные особенности, характерные для Vibrios , мы выбрали Vibrio alginolyticus в качестве модельной системы. Обширные генетические, функциональные и структурные исследования сделали полярный жгутик V. alginolyticus одним из наиболее охарактеризованных покрытых оболочкой жгутиков. Хотя V. alginolyticus обладает одним управляемым Na ⁺ полярным жгутиком, мутации привели к множественным полярным фенотипам жгутика (27⇓⇓ – 30), которые идеально подходят для структурной характеристики in situ с высоким разрешением.Здесь мы используем крио-ЭТ с высокой пропускной способностью и усреднение субтомограмм для всестороннего анализа моторов у нескольких мутантов V. alginolyticus , обеспечивая понимание аспектов жгутиков в оболочке и подвижности Vibrio .

Результаты

Визуализация

Vibrio в оболочке жгутиков в интактных клетках.

V. alginolyticus VIO5 обычно имеет единственный полярный покрытый оболочкой жгутик (рис. 1 A ). К нашему удивлению, мы также наблюдали незащищенный жгутик после визуализации более 30 клеток дикого типа (рис.1 B ), что указывает на редкость, но возможность сборки незащищенных жгутиков в V. alginolyticus . Как и ожидалось, диаметр нити без оболочки значительно меньше диаметра нити с оболочкой, и двигатели также заметно отличаются в оригинальных реконструкциях ячейки (рис. 1 A и B ). Чтобы лучше выявить разницу между двумя разными типами жгутиков, мы хотели сравнить их бок о бок в одной ячейке. Для этого мы использовали мутант flhG , который, как известно, собирает множественные полярные жгутики (27, 28).Важно отметить, что множественные полярные жгутики обычно образуют большой кластер на одном полюсе клетки; малый диаметр ячейки около полюса оптимален для крио-ET анализа с высоким разрешением (рис. 1 C ).

Рис. 1.

In situ V. alginolyticus жгутиковые структуры: с оболочкой и без оболочки. ( A ) Репрезентативный срез трехмерной реконструкции V. alginolyticus VIO5 дикого типа показывает единственный покрытый оболочкой жгутик на полюсе клетки. ( B ) Другой срез показывает единственный незащищенный жгутик.( C ) На томографическом срезе штамма (KK148) видны множественные полярные жгутики. ( D ) Среднее значение по классу показывает структуру моторики жгутиков в оболочке. ( E ) Другой средний класс показывает структуру моторики жгутиков без оболочки. ( F ) Усредненная структура двигателя E. coli используется в качестве эталона для сравнения. ( G — I ) Схематические модели накладываются на карты плотности крио-ET D — F соответственно.Ключевые различия между моторными структурами Vibrio и E. coli выделены: уплотнительное кольцо фиолетового цвета, кольцо H и кольцо T желтым, а дополнительная плотность (окрашена розовым цветом), расположенная за пределами кольца C. ЦМ — цитоплазматическая мембрана; ОМ, наружная мембрана. Плотность статора не видна в глобально усредненных структурах двигателей Vibrio и E. coli , вероятно, из-за высокодинамичной природы статоров.

Novel

Vibrio Жгутиковые двигательные структуры.

Из ~ 600 томограмм различных бактериальных клеток мы создали ~ 4000 реконструкций двигателей, встроенных в клеточную оболочку. После тщательного сопоставления и усреднения субтомограмм мы получили две различные моторные структуры Vibrio с беспрецедентной детализацией (рис.1 D и E ) и сравнили эти структуры с двигательной структурой из E. coli (рис.1 ). F ). Моторные структуры имеют несколько общих черт: они аналогичным образом встроены в цитоплазматическую и внешнюю мембраны и имеют кольцо C, кольцо MS, экспортный аппарат и стержень (включая проксимальный стержень и дистальный стержень) и окружающие его кольца L / P. (Рисунок.1 G — I ).

Несмотря на это сходство, двигатели Vibrio демонстрируют несколько заметных отличий от структур E. coli . Например, двигатели Vibrio обладают дополнительной плотностью (окрашенной в желтый цвет) вокруг колец L / P (рис.1 G и H ), которые, вероятно, соответствуют специфическим для Vibrio структурам, таким как H и Т-образные кольца. Мы также наблюдали дополнительные структуры вокруг С-кольца (рис.1 D и G ) в Vibrio , которые отсутствуют в двигателе E. coli . Существует внешняя кольцевая структура, связанная только с покрытым оболочкой жгутиком (Рис.1 D и G ), но не с незащищенным жгутиком (Рис.1 E и F ), которую мы назвали O кольцо (внешнее мембранное кольцо). Интересно, что наличие этого кольца коррелирует с поразительным изгибом внешней мембраны на 90 ° и образованием мембранной оболочки, окружающей нить, что позволяет предположить, что уплотнительное кольцо может играть решающую роль в формировании и функционировании оболочки.Напротив, в отсутствие уплотнительного кольца внешняя мембрана четко пересекает L-кольцо в необолочечном жгутике Vibrio (рис.1 E и H ), а также жгутике E. coli (рис. Рис.1 F и I ).

Динамическая природа жгутикового двигателя в оболочке в

Vibrio .

Сравнение жгутиковых двигателей в оболочке и без оболочки также предполагает внутреннюю гибкость, на что указывает относительная нечеткость кольца MS и кольца С в оболочке жгутикового двигателя (рис.1 D ). Для дальнейшего изучения этой потенциальной гибкости мы сгенерировали три различных средних класса, а затем выровняли их на основе кольца MS и кольца C (рис. 2 A — C ). Примечательно, что расстояние между цитоплазматической мембраной и внешней мембраной варьировалось от 35 до 29 нм (рис.2 A , C , D и F ), хотя наиболее распространенным классом было 32 нм (рис. 2 B и E ). Интересно, что внешняя мембрана и специфические для Vibrio особенности (T / H / O кольца) все координированно смещают свои позиции, указывая тем самым, что этот комплекс обладает гибкостью, чтобы скользить вдоль дистальной части стержня жгутика.Напротив, жгутик без оболочки как у Vibrio , так и у E. coli оказывается жестким, вероятно, из-за тесного взаимодействия между внешней мембраной и L-кольцом.

Рис. 2.

Конформационная гибкость жгутиковых двигателей в оболочке в Vibrio . Обшитые в оболочке моторные структуры жгутиков трех различных средних классов показывают различия в расстоянии между CM и OM ( A — C ). Соответствующие схематические модели ( D — F ) показывают связанный с внешней мембраной комплекс, слегка смещающийся вдоль дистального стержня (голубой).

Определение характеристик компонентов Т-образного кольца на месте.

Основные особенности Vibrio сходны как в покрытых оболочкой, так и в незащищенных жгутиках (рис. 1). Хотя Т-образное кольцо является основной особенностью Vibrio , необходимой для сборки статора вокруг ротора (19), его структура и состав остаются неопределенными. Для характеристики Т-кольца мы использовали крио-ЭТ для анализа мутантов ∆ motX и ∆ motY на фоне flhG .У мутанта ∆ motY мы обнаружили, что большая часть плотности Т-кольца, расположенной под кольцом P, не видна по сравнению со штаммом дикого типа и мутантом ∆ pomAB , у которого отсутствуют статоры (рис. 1 G и H для дикого типа; Рис.3 G и H для ∆ pomAB ; Рис.3 B и C для ∆ motY ). В клетках с дефектом MotX не наблюдалось значительных различий в Т-кольце (рис. 3 D — F ).Сравнение между жгутиками ∆ motX и ∆ pomAB предполагает, что белок MotX, вероятно, расположен под MotY in situ (рис. 3 E , F , H и I ). Более того, плотности, соответствующие уплотнительному кольцу и H-кольцу, остаются видимыми в этих мутантах с Т-кольцом, предполагая, что их образование не зависит от сборки Т-кольца.

Рис. 3.

Определение характеристик компонентов Т-образного кольца на месте. ( A ) Репрезентативный срез томограммы штамма ∆ motY .( B ) Усредненная структура двигателя ∆ motY . ( C ) Схематическая модель двигателя без MotY. ( D ) Типичный срез томограммы мутанта ∆ motX . ( E ) Усредненная структура двигателя ∆ motX . ( F ) Схематическая модель двигателя без MotX. MotY окрашен в оранжевый цвет. ( G ) Типичный срез томограммы мутанта ∆ pomAB . ( H ) Усредненная структура двигателя ∆ pomAB .( I ) Схематическая модель двигателя без PomA и PomB. Вероятное расположение MotX, которое во многом основано на предыдущем анализе (19), отмечено желтым цветом.

Архитектура

Vibrio — Специальное Т-образное кольцо.

По нашим данным, MotY является основным компонентом Т-образного кольца. Фактически, 13 копий мономера MotY хорошо вписываются в дистальную часть Т-кольца (рис. 4), основываясь на кристаллической структуре MotY и биохимических характеристиках, о которых сообщалось ранее (31).Каждый мономер MotY состоит из двух отдельных доменов. С-концевой домен MotY содержит предполагаемый пептидогликан-связывающий мотив, тогда как N-концевой домен MotY необходим для сборки статора (31). Один мономер может быть помещен в каждую субъединицу Т-кольца. Точно так же мы поместили 13 копий кристаллических структур FlgT в плотности на вершине кольца MotY на основе структурного и функционального анализа (21). Вместе с MotY они образуют уникальную структуру Vibrio вокруг P-кольца.

Рис. 4.

Архитектура Т-образного кольца Vibrio . ( A ) Моторная структура Vibrio с различными доменами выделена на трехмерной визуализации поверхности. ( B ) Кристаллические структуры MotY и FlgT были вписаны в карту Т-кольца и небольшую часть Н-кольца, соответственно. ( C ) Наружная мембрана и связанные с ней компоненты жгутика были удалены, чтобы лучше видеть Т-образное кольцо. ( D ) Вид сверху на двигатель Vibrio показывает уплотнительное кольцо, крюк и ОМ.( E ) Другой вид сверху после удаления структур, связанных с OM, показывает CM, крючок и Т-образное кольцо. ( F ) Кристаллические структуры FlgT и MotY хорошо вписываются в Т-образное кольцо.

Статор собирается вокруг Т-образного и С-образного колец.

И MotY, и MotX участвуют в сборке и работе статора. Однако все усредненные структуры из моторов дикого типа и мутантов с Т-кольцом не показали каких-либо очевидных плотностей, которые могли быть внесены статорами. Фактически, структура мотора дикого типа аналогична структуре мотора ∆ pomAB , в котором статорные белки PomA и PomB отсутствуют.Следовательно, у V. alginolyticus или E. coli нет четко определенной структуры статора. Наше наблюдение согласуется с представлением о высокой динамичности статоров у этих видов.

Чтобы исследовать структуру и расположение статоров в V. alginolyticus , мы использовали трехмерную классификацию для анализа плотности вокруг Т-кольца и МС-кольца. В одном из 20 средних значений класса очевидны дополнительные плотности, окружающие Т-кольцо (рис. 5 A ), тогда как большинство средних значений класса от дикого типа и все средние значения класса от ∆ pomAB не демонстрируют этих структур, что предполагает дополнительные плотности действительно формируются статорами (рис.5 А ). Чтобы визуализировать дополнительные плотности с большей ясностью, мы создали симметричную структуру комплекса статора (рис. 5 A ), которая затем была отображена на общую структуру двигателя, как показано на рис. 5 B и C .

Рис. 5.

Общая архитектура жгутикового двигателя Vibrio . ( A ) Один средний класс двигателя дикого типа. Первая панель — это центральная секция. Вторая панель представляет собой разрез Т-образного кольца.Третья панель представляет собой поперечный разрез верхней части цитоплазматической мембраны (ЦМ). Четвертая панель представляет собой соответствующее поперечное сечение третьей панели после 13-кратной симметрии. Показаны вид сбоку ( B ) и вид сверху ( C ) всей конструкции жгутикового двигателя Vibrio .

Общая архитектура

Vibrio Flagellar Motor.

Т-образное кольцо демонстрирует уникальную 13-кратную симметрию как в оболочке, так и без нее, и, вероятно, функционирует как платформа для набора 13 высокодинамичных статоров, собранных вокруг ротора (рис.5 В ). MotY, потенциально прикрепленный к клеточной стенке, может функционировать как каркас для Т-кольца. Периплазматический домен статора, по-видимому, напрямую взаимодействует с MotY (рис. 5 B и C ). По сравнению с хорошо изученным мотором жгутика без оболочки у E. coli (рис.1 F и I ), эти специфичные для Vibrio компоненты не только отражают сложность оболочечного жгутика Vibrio (рис. 5 C ), но также обеспечивают прочную основу для установления характерной высокой скорости и устойчивости подвижности Vibrio .

Обсуждение

Штамм

Vibrio flhG как модельная система для структурного анализа in situ жгутиков в оболочке.

Полярный флагеллум V. alginolyticus был тщательно изучен с помощью генетических, биохимических, функциональных и структурных подходов и является признанной моделью покрытого оболочкой жгутика (32). Однако, несмотря на успех крио-ЭТ в характеристике многих других бактериальных жгутиковых структур (23⇓ – 25, 33⇓⇓⇓⇓ – 38), этот метод ранее не использовался для визуализации интактных V. дикого типа.alginolyticus жгутиковый мотор, отчасти потому, что одиночный полярный жгутик в больших клетках V. alginolyticus является субоптимальным для высокопроизводительного крио-ET-анализа. К счастью, дефектный локус flhG приводит к множественным полярным жгутикам у V. cholerae и V. alginolyticus (27⇓ – 29), а также у Pseudomonas и Shewanella (39, 40). Недавно дефект в hubP также дал фенотип множественных жгутиков в V.alginolyticus (30). Хотя клетки V. alginolyticus все еще крупнее оптимального, область полюса клетки с множественными жгутиками часто бывает достаточно тонкой для крио-ЭТ визуализации. Вместе с доступными генетическими подходами для создания дополнительных мутаций в дефектном фоне flhG , множественный полярный флагеллированный штамм V. alginolyticus представляет собой идеальную модельную систему для структурного анализа с высоким разрешением жгутиков в оболочке in situ.

Сравнение жгутиков в оболочке и без оболочки показывает значительную реконструкцию внешней мембраны.

Как и ожидалось, большинство полярных жгутиков, наблюдаемых у клеток V. alginolyticus , покрыты оболочкой. Однако, к нашему удивлению, жгутики без оболочки были обнаружены в клетках дикого типа V. alginolyticus . Комбинация крио-ЭТ с высокой производительностью и клеток с множественными полярными жгутиками позволила нам получить достаточно данных для определения двух различных структур жгутиков в оболочке и без оболочки в одной и той же клетке. Основные компоненты двух различных жгутиков Vibrio сопоставимы с таковыми у E.coli , включая кольцо C, устройство экспорта, кольцо MS, стержень, кольца P / L и крючок. Кроме того, внешняя мембрана, по-видимому, напрямую взаимодействует с L-кольцом необолочечного жгутика в V. alginolyticus и E. coli , хотя незащищенный жгутик Vibrio имеет Т-кольцо и Н-кольцо, оба специфичные для Вибрионы .

Важно отметить, что жгутик в оболочке V. alginolyticus разительно отличается от жгутика без оболочки в точке, где жгутик пересекает внешнюю мембрану.Примечательно, что в оболочке жгутика есть новое уплотнительное кольцо, которое связано с изгибом на 90 ° внешней мембраны, которая образует оболочку вокруг крючка и нити. Мы предполагаем, что уплотнительное кольцо может образовывать каркас для драматической перестройки внешней мембраны с образованием оболочки. Примечательно, что уплотнительное кольцо еще не было обнаружено в недавно описанных структурах покрытых оболочкой жгутиков из V. fischeri (25) и H. pylori (36). Тем не менее, жгутики разных видов в оболочке имеют общую тему: внешняя мембрана не пересекается напрямую с L-кольцом, которое функционирует как втулка, встроенная во внешнюю мембрану в модельных системах, таких как E.coli и Salmonella . FlgO представляет собой белок внешней мембраны, необходимый для подвижности жгутиков у Vibrio cholerae (41). FlgO хорошо сохраняется у видов Vibrio . Поэтому мы предположили, что уплотнительное кольцо может состоять из FlgO. Мутагенез и маркировка GFP-тегов вместе с Cryo-ET потребуются для идентификации генов, ответственных за образование уплотнительного кольца.

Структура и функции уникальной особенности

Vibrio-.

Модель V.alginolyticus flagellum обладает двумя специфическими для Vibrio особенностями в периплазме: Т-кольцом и Н-кольцом. Структура Т-образного кольца является важным компонентом управляемого ионами натрия жгутикового двигателя в дополнение к PomA / B (19). Наш сравнительный анализ моторных структур клеток дикого типа и нескольких мутантов Т-кольца (∆ motX ∆ motY , ∆ motX , ∆ motY ) показал, что Т-кольцо имеет 13-кратную симметрию. MotY является основным белком, ответственным за его сборку, поскольку 13 копий MotY хорошо вписываются в Т-кольцо.Напротив, расположение MotX четко не определено, потому что делеция гена motX не изменила существенно общую форму Т-кольца. Поскольку MotX взаимодействует с MotY, и оба белка важны для сборки статора (19, 42), мы постулируем, что MotX собирается на внешнем крае Т-кольца.

Кольцо H, по-видимому, связано с кольцом L и важно для сборки и функционирования двигателя. FlgT играет критическую роль в образовании H-кольца, которое, вероятно, состоит из других жгутиковых белков, таких как FlgO и FlgP.Однако общая структура кольца H намного сложнее. Мы предполагаем, что FlgT образует кольцо поверх кольца MotY. Наша модель подтверждается предыдущими биохимическими данными и наблюдением, что мутантные клетки ∆ flgT теряют как Т-, так и Н-кольца (43).

И H, и T-кольца тесно связаны с L / P-кольцами. Они образуют большой комплекс, специфичный для Vibrio , под внешней мембраной. Важно отметить, что мы продемонстрировали, что 13-кратная симметрия Т-колец сохраняется как у штаммов дикого типа, так и у штаммов ∆ pomAB , указывая на то, что симметричные особенности Т-кольца не зависят от статоров.Напротив, 13-кратная симметрия Т-образного кольца не видна в структуре мотора V. fischeri (25), хотя есть 13 статоров, связанных с мотором V. fischeri (Рис. S1). Одна из возможностей состоит в том, что статоры в V. fischeri более статически локализованы вокруг двигателей, как и у спирохет (24, 37). Разумно предположить, что в V. alginolyticus 13-кратное симметричное Т-кольцо обеспечивает платформу для набора до 13 статоров динамическим образом, возможно, в ответ на факторы окружающей среды (44).

Рис. S1.

Сравнение жгутиковых двигателей между V. fischeri и V. alginolyticus . ( A ) Центральный участок усредненной структуры (EMD-3156) из 251 моторной частицы в мутанте ∆ pomB из V. fischeri . ( B ) Центральная часть усредненной структуры усредненная моторная структура из 999 моторных частиц в V. alginolyticus ∆ flhG ∆ pomAB . Красные стрелки подчеркивают разницу в уплотнительном кольце.( C ) Поперечное сечение Т-образного кольца, обозначенное желтой пунктирной линией в A . ( D ) Поперечное сечение Т-образного кольца показывает 13-кратную симметрию Т-образного кольца. Никакой очевидной симметрии не видно в Т-образном кольце конструкции двигателя из V. fischeri ∆ pomB . (Масштабная шкала, 20 нм.)

Действительно, в то время как плотности статора в V. alginolyticus могут быть локализованы за пределами Т-образного кольца в некоторых средних классах, они не наблюдаются в среднем глобальном масштабе, что согласуется с представлением о том, что статоры очень динамичны в цитоплазматической мембране, как было продемонстрировано ранее (9–11).Динамический характер статоров Vibrio зависит от ионов натрия (7), FliL и других белков (45). Действительно, статоры у разных видов значительно различаются. Максимальное число статоров в E. coli составляет не менее 11, как измерено с помощью флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения (5). Новаторское крио-ET исследование жгутикового двигателя Treponema primitia выявило предполагаемое кольцо статора с 16-кратной симметрией (24). Крио-ЭТ исследование B.burgdorferi выявили, что 16 статоров встроены в сильно изогнутую цитоплазматическую мембрану спирохет (26, 37). Недавнее исследование жгутикового двигателя V. fischeri выявило 13 статоров (25), тогда как H. pylori может иметь 18 статоров вокруг ротора (36).

Внутренняя пластичность жгутиков с оболочкой.

Мы обнаружили удивительное и значительное изменение расстояния между кольцом MS и связанным с внешней мембраной комплексом в наших изображениях жгутиковых двигателей V. alginolyticus .Поскольку жгутиковые стержни в клетках дикого типа имеют постоянную длину, мы предполагаем, что наблюдаемое нами изменение длины является результатом способности колец L / P / H / T / O скользить по дистальному стержню вместе с соответствующим внешним мембрана. Хотя обычно считается, что стержень вращается внутри P и L колец, которые функционируют как втулки в слое PG и внешней мембране, соответственно, ранее не сообщалось, что кольца P / L могут скользить по стержню. Было показано, что несколько P-колец собираются вокруг более длинного стержня; однако P-кольца не были расположены равномерно (46), предполагая, что P-кольцо может по-разному взаимодействовать с нижележащим белковым компонентом FlgG дистального стержня.Фактически, недавнее структурное исследование показало, что дистальный стержень имеет жесткую и гладкую поверхность диаметром ~ 13 нм и длиной 18 нм (47). Эти общие свойства дистального стержня согласуются с его основной функцией как приводной вал и могут позволить внешнему мембранно-связанному комплексу гибко перемещаться с мембранной оболочкой во время вращения жгутиков. В качестве альтернативы, изменения расстояния могут отражать конструкции, которые фиксируются для каждого двигателя, но отличаются по длине для разных двигателей.

В заключение, наши результаты демонстрируют, что В.Система alginolyticus идеально подходит для изучения архитектуры жгутиков в оболочке in situ. Мы выявляем кольцо внешней мембраны и большое конформационное изменение внешней мембраны, связанное с образованием оболочки и сборкой жгутиков. Мы также обнаружили значительные вариации в расположении мотора относительно жгутика жгутика, подтверждая удивительный уровень конформационной гибкости покрытых оболочкой жгутиков. Кроме того, мы демонстрируем 13-кратную симметрию двигателя, что дает основу для лучшего понимания специфических взаимодействий ротора и статора в Vibrio .Наконец, наши исследования дают представление об уникальных аспектах покрытых оболочкой жгутиков, которые широко используются многими бактериальными патогенами для установления инфекции и распространения среди людей и других млекопитающих-хозяев.

Материалы и методы

Рост бактерий и подготовка образцов.

Бактериальные штаммы, использованные в этом исследовании, перечислены в таблице 1. Штаммы V. alginolyticus культивировали в течение ночи при 30 ° C на среде VC [0,5% (вес / объем) полипептон, 0,5% (вес / объем) дрожжевой экстракт, 3% (вес / объем) NaCl, 0.4% (вес / объем) K ₂ HPO ₄ , 0,2% (вес / объем) глюкозы]. Ночную культуру разбавляли в 100 раз свежей средой VC и культивировали при 30 ° C при 250 об / мин (Taitec, BioShaker BR-23FH). Через 5 ч клетки собирали, промывали 2 раза и, наконец, разбавляли средой TMN500 (50 мМ Трис · HCl при pH 7,5, 5 мМ глюкоза, 5 мМ MgCl и 500 мМ NaCl) (48). Раствор коллоидного золота (диаметром 10 нм) добавляли к разбавленным образцам Vibrio , чтобы получить 10-кратное разбавление, а затем наносили на только что нагретую тлеющим разрядом решетку из дырявого углерода в течение 1 мин.Сетку промокали фильтровальной бумагой и быстро погружали в жидкий этан в самодельном плунжерном устройстве, как описано (49).

Таблица 1.

Штаммы бактерий

Cryo-ET Сбор данных и обработка изображений.

Замороженные гидратированные образцы переносили в электронный микроскоп Polara G2 (FEI), оборудованный автоэмиссионной пушкой на 300 кВ и детектором прямых электронов (Gatan K2 Summit). Изображения наблюдались при увеличении 15 400 раз, что дало 0,25 нм / пиксель.SerialEM (50) использовался для сбора серий наклона при дефокусировке ~ 8 мкм. Общая доза 50 e ^— / Å ² распределяется между 35 изображениями с наклоном, охватывающими углы от -51 ° до + 51 ° с шагом наклона 3 °. Для каждого сбора серии наклона использовался режим фракционирования дозы для создания 8–10 кадров на одно проекционное изображение. Собранные фракционированные по дозе данные сначала обрабатывались программой motioncorr для создания файлов стека с поправкой на дрейф (51). Файлы стека были выровнены с использованием золотых реперных маркеров и объемов, восстановленных методом взвешенной обратной проекции, с использованием программного обеспечения IMOD (52) для создания томограмм.Всего было получено 1293 томограммы клеток дикого типа и мутантных клеток (таблица 2).

Анализ субтомограмм.

Жгутиковые моторы бактерий определяли вручную с помощью программы i3 (53, 54). Мы выбрали две точки на каждом двигателе: одну точку в области С-образного кольца, а другую — возле крючка жгутика. Затем оценивались ориентация и географические координаты выбранных частиц. Всего 8761 субтомограмма двигателей Vibrio и 1200 субтомограмм E.coli использовали для анализа субтомограмм. Томографический пакет i3 использовался на основе метода «выравнивания по классификации» с отсутствующей компенсацией клина (53, 54) для создания усредненной структуры двигателя, как описано ранее (33, 49).

3D визуализация и моделирование.

Томографические реконструкции визуализированы с помощью IMOD (52). Программное обеспечение UCSF Chimera использовалось для трехмерной визуализации средних значений субтомограмм и молекулярного моделирования (55).Кристаллические структуры MotY (PDB ID: 2ZF8) и FlgT (PDB ID: 3W1E) из V. alginolyticus были прикреплены к нашим картам плотности с использованием функции «вписаться в карту» в UCSF Chimera.

Благодарности

Мы благодарим Уильяма Марголина за критическое прочтение рукописи перед отправкой. Эта работа была поддержана GM107629 от Национального института общей медицины и AU-1714 от Welch Foundation (J.L.).

Сноски

• Автор: С.Z., S.K., M.H. и J.L. спланировали исследование; S.Z., T.N., B.H., S.K. и J.L. проводили исследования; Т. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; S.Z., S.K., M.H. и J.L. проанализировали данные; и С.З., С.К., М.Х. и Дж.Л. написали статью.

• Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

• Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

• Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1712489114/-/DCSupplemental.

Бактерии в оболочке | Encyclopedia.com

бактерий в оболочке — это бактерии, которые растут в виде длинных нитей, внешняя часть которых покрыта слоем, известным как оболочка. Внутри оболочки бактерии могут расти и делиться. Примеры бактерий в оболочке включают Leptothrix discophora (также известные как «железные бактерии») и Sphaerotilus natans .

Бактерии в оболочке — обычное явление в бактериальных сообществах воды и почвы.В этих средах оболочка часто покрыта осадками элементов из воды или почвы, таких как оксиды железа и марганца. Элементы нестабильны в растворе и, следовательно, легко выйдут из решения при представлении соответствующего сайта.

Оболочка, покрывающая бактерии, может иметь различную конструкцию. Большая часть структурной информации была получена при наблюдении тонких срезов образца с использованием просвечивающего электронного микроскопа .Оболочка, окружающая виды Leptothrix , по внешнему виду похожа на гликокаликс. Часто осаждение металлов в сетке оболочки приводит к образованию участков, в которых материал кристаллизовался. Напротив, оболочка Sphaerotilus natans имеет вид «железнодорожных путей», который типичен для биологической мембраны, состоящей из двух слоев липидных молекул.

Электронно-микроскопические исследования видов Leptothrix показали, что бактерия тесно связана с вышележащей оболочкой.Соединения состоят из выпуклостей, которые находятся по всей поверхности бактерии. Напротив, Sphaerotilus natans не связан с вышележащим влагалищем.

И Leptothrix , и Sphaerotilus natans могут существовать независимо от оболочки. Бактерии обоих родов имеют жизненный цикл, который включает в себя свободно плавающую форму (называемую роевой клеткой), которая не покрыта оболочкой. У свободно плавающих форм есть жгутики на одном конце бактерий, которые продвигают клетки.Если бактерии заключены в оболочку, они называются бактериями в оболочке или покоящимися бактериями.

Оболочки бактерий, как правило, производятся, когда бактерии находятся в водной или почвенной среде, содержащей большое количество органических веществ. Оболочка может служить для защиты бактерий в этих средах. Кроме того, способность металлических соединений осаждаться на оболочке может обеспечить бактерии легким запасом таких неорганических питательных веществ. Например, Leptothrix может использовать марганец, содержащийся в осадке оксида марганца на оболочке.

Обшитые: Подплечики обшитые втачные цв черный размер 10 (уп 100 пар) в-10чер купить в Москве